C型肝炎ウイルスNS5B蛋白と結合するRNAの解析

代表：泉谷昌志・湯橋一仁

C型肝炎ウイルスHepatitis C virus（HCV）は１本鎖RNAウイルスである。HCV-RNAから作られる非構造蛋白のひとつであるNS5BはRNA依存性RNAポリメレース（RdRp）活性を持ち，ウイルスの複製に重要な働きをすると考えられている。NS5BによりHCV-RNA（プラス鎖）から相補的なマイナス鎖RNAが合成され，このマイナス鎖RNAを鋳型としてプラス鎖RNAが合成されると考えられている。詳細なウイルスの複製機構は解明されていないが，NS5BとHCV-RNAの結合はウイルス複製において重要であると考えられている。また，NS5BはHCV-RNA以外のRNAとも結合することが知られており，どのようなRNAを認識するかはHCV-RNAの複製機構を考える上で重要と考えられる。

当研究室では肝細胞内のmRNAの中からNS5Bと結合するものを選別した。これらのRNAがin vitroでNS5BのRdRp活性を阻害し，また，NS5Bにより複製を受けることを示した。さらに，これらのRNAがNS5Bを含めたHCV replication complexと肝細胞内でも結合することを，full genomic replicon細胞を用いて免疫沈降法により示した。加えて，replication complexの中でもNS5Bに結合することを，NS5Bを単独発現させたCOS細胞を用いて示した。

また，NS5Bに結合するRNAの配列を調べるため，In vitro selectionの手法を用いて，ランダムなRNAプールよりNS5Bに結合するRNAを選び出した。さらにHCV RNAのプラス鎖・マイナス鎖を用いて，NS5Bに結合する構造を解析した。